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抵抗素(Resistin) ELISA 試劑盒
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi),后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺來(lái)進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,故可極大地放大反應(yīng)效果,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:
①固相的抗原或抗體
②酶標(biāo)記的抗原或抗體
③酶作用的底物(顯色劑)。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。
抵抗素(Resistin) ELISA 試劑盒
定量測(cè)定
ELISA操作步驟復(fù)雜,影響反應(yīng)因素較多,特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的*,因此在定量測(cè)定中,每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的范圍一般較寬,曲線(xiàn)高點(diǎn)的吸光度可接近2.0,繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)值,以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo),以吸光度為縱坐標(biāo),將各濃度的值逐點(diǎn)連接,所得曲線(xiàn)一般呈S形,其頭、尾部曲線(xiàn)趨于平坦,中央較呈直線(xiàn)的部分是理想的檢測(cè)區(qū)域。
測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法,其標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。ELISA測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)注意圖中橫坐標(biāo)為對(duì)數(shù)關(guān)系,這更有利于測(cè)定系統(tǒng)的表達(dá)。
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