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環(huán)磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

簡要描述:環(huán)磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒 Cyclic adenosine monophosphate Assay Kit!本公司長期經(jīng)營代理試劑盒,價格實惠,質(zhì)量保證,價格請咨詢在線人員。

  • 產(chǎn)品型號:cAMP
  • 廠商性質(zhì):經(jīng)銷商
  • 更新時間:2024-02-29
  • 訪  問  量:1199

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環(huán)磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

工作原理

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測定樣品中的水平。向預(yù)先包被抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和HRP標(biāo)記的抗體,經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的組分,然后再加入底物AB,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中的濃度呈正相關(guān)。

環(huán)磷酸腺苷(cAMP) ELISA 試劑盒

1

標(biāo)準(zhǔn)品(100pg/ml

0.5ml

7

顯色劑A

6ml

2

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6mL

8

顯色劑B

6ml

3

酶標(biāo)包被板

12×8

9

終止液

6ml

4

酶標(biāo)試劑

6ml

10

說明書

1

5

20×濃縮洗滌液

25ml

11

封板膜

2

6

樣品稀釋液

6ml

12

密封袋

1

注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:100、50、25、12.5、6.25、0 pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

1.   37℃恒溫箱。

2.   標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3.   精密移液器及一次性吸頭

4.   蒸餾水,

5.   一次性試管

6.   吸水紙

注意事項

1.   2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.   各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差

3.   建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。

4.   嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

5.   為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

6.   不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7.   底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

 

標(biāo)本要求

1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

1.   分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。

2.   棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

3.   每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

4.   取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

5.   測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

6.   根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

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