1 酶標儀的外觀
酶標儀上應有儀器名稱,型號,編號,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關(guān)均能正常工作,外表面無明顯機械損傷;顯示文字應清楚完整。
2 酶標儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,在吸光度0.0A處,測定標稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應超過±0.00。
3 吸光度測定的準確度
選用405,492和620 nm波長,以空氣為參比,分別測定標稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用測試板代替酶標板,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計算準確度:AA=1/3(A、+A。+A3)-A:(A:為標準值)。
4 吸光度測定的重復性波長
選擇同(3),在酶標板排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復測定5次。記錄每次測定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對應孔吸光度值。按下式計算重復性:
5 酶標儀的線性
選用540nm波長,將標稱值0.5,1.0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中,重復測定3次。線性誤差:式中A1為片中性濾光片吸光度均值,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,A1,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
6 酶標儀測定速度的檢定
選用492nm波長,放人96孔酶標板進行測定,用秒表計測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時間。酶標儀除了在選購時,應盡可能自檢外,在使用中也應定期檢定,以保證酶標儀測定的有效性。
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,在分析天平上準確稱取o.2829g,置于100ml燒杯中,用0.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量0.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,搖勻。